2024年8月2日中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院韓為東、聶晶研究團(tuán)隊(duì)在血液學(xué)頂級(jí)期刊Blood（IF=21）上發(fā)表題為“Epigenetic agents plus anti-PD-1 reshapes tumor microenvironment and restores antitumor efficacy in Hodgkin lymphoma”的研究論文[1]。該研究旨在評(píng)估CDP療法（組蛋白去乙酰酶抑制劑西達(dá)本胺、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑地西他濱和抗PD-1抗體卡瑞利珠單抗）在先前接受過(guò)DP療法（地西他濱加卡瑞利珠單抗）后復(fù)發(fā)/進(jìn)展的cHL患者中的安全性和有效性，這對(duì)于治療方案的開(kāi)發(fā)和改善DP治療后復(fù)發(fā)患者的預(yù)后意義重大，同時(shí)通過(guò)腫瘤微環(huán)境解析指出 HRS 腫瘤異質(zhì)性，闡釋表觀免疫治療 cHL 抗瘤效能關(guān)鍵作用機(jī)理——靶向CD30- HRS樣細(xì)胞治療和阻斷IL-21通路，這也為其他腫瘤免疫治療奠定理論基礎(chǔ)。
文章解析
1.患者情況
研究者入組了52名復(fù)發(fā)或進(jìn)展的cHL患者接受三藥聯(lián)合CDP治療。患者中位年齡為29歲，96%的患者接受過(guò)三次或以上的系統(tǒng)治療，先前治療的中位次數(shù)為5次。12名患者曾接受自體干細(xì)胞移植，40名患者因各種原因被認(rèn)為不適合移植。85%的患者在研究前最后一次治療為地西他濱加抗PD-1（DP），客觀緩解率為77%，其中29%患者達(dá)到了完全緩解。先前DP治療的中位無(wú)進(jìn)展生存期為14.6個(gè)月。
2.CDP治療的療效
截至2023年12月10日，52名接受CDP（西達(dá)本胺-地西他濱-卡瑞利珠單抗）聯(lián)合治療的患者中，94%獲得客觀反應(yīng)，50%達(dá)到了完全緩解（CR）。中位治療周期為20次，持續(xù)時(shí)間21個(gè)月。對(duì)于至少接受5次前期治療的患者，客觀反應(yīng)率為90%。在中位隨訪32個(gè)月后，12名持續(xù)CR的患者停用CDP治療，且所有患者存活。中位無(wú)進(jìn)展生存期（PFS）為29.4個(gè)月，1年和2年的PFS率分別為94%和60%。常見(jiàn)的不良事件包括白細(xì)胞減少（73.1%）和腹瀉（36.5%），無(wú)患者因不良事件停止治療?？傮w來(lái)看，CDP治療顯示出良好的療效和安全性。
3.scRNA-seq詳細(xì)表征HRS樣細(xì)胞
研究者通過(guò)scRNA-seq對(duì)cHL中的Hodgkin Reed/Sternberg（HRS）樣細(xì)胞進(jìn)行了深入分析，建立了一個(gè)涵蓋9名患者17個(gè)活檢樣本的單細(xì)胞圖譜。同時(shí)，通過(guò)單細(xì)胞T細(xì)胞受體測(cè)序（scTCR-seq）識(shí)別出82684種克隆類(lèi)型。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)少部分細(xì)胞被標(biāo)識(shí)為HRS樣細(xì)胞，這些細(xì)胞表達(dá)CD30（TNFRSF8）及DHRS2等特征性標(biāo)記物。值得注意的是，研究中還發(fā)現(xiàn)了一些CD30-HRS樣細(xì)胞，這一發(fā)現(xiàn)挑戰(zhàn)了CD30作為HRS細(xì)胞普遍表達(dá)標(biāo)志的傳統(tǒng)觀點(diǎn)。在CD30+和CD30-HRS樣細(xì)胞中，經(jīng)典HRS標(biāo)記物PAX5、IRF4和FUT4均表現(xiàn)出下調(diào)，而DHRS2基因則特異性高表達(dá)。研究表明兩種HRS樣細(xì)胞共享某些體細(xì)胞突變，暗示它們可能具有共同的克隆起源。主成分分析進(jìn)一步揭示，這兩類(lèi)細(xì)胞在生物學(xué)狀態(tài)上存在連續(xù)性，CD30-細(xì)胞表現(xiàn)出更高的分化潛力，但免疫通路的活性較低。最后研究者通過(guò)多重免疫組化（mIHC）驗(yàn)證了DHRS2+CD30-HRS樣細(xì)胞的存在，為理解HRS樣細(xì)胞的多樣性和功能提供了新的視角。
4.CD30-HRS樣細(xì)胞對(duì)PD-1不敏感，對(duì)CDP治療有響應(yīng)
研究者通過(guò)五組對(duì)CDP療法有響應(yīng)的腫瘤和三組對(duì)DP療法有抗性的腫瘤進(jìn)行治療相關(guān)分析，以探索逆轉(zhuǎn)抗PD-1抗性的關(guān)鍵因素。研究結(jié)果表明響應(yīng)CDP療法的腫瘤中總HRS樣細(xì)胞的數(shù)量顯著減少，而對(duì)DP療法無(wú)響應(yīng)的腫瘤中未觀察到減少。這一發(fā)現(xiàn)表明，CD30- HRS樣細(xì)胞在CDP治療后數(shù)量減少，提示它們可能對(duì)抗PD-1的免疫療法敏感性較低，研究者通過(guò)進(jìn)一步的患者案例驗(yàn)證了這一假設(shè)，在DP治療失敗后，有觀察到CD30- HRS樣細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄表型轉(zhuǎn)變?yōu)镃D30+ HRS樣細(xì)胞。研究者使用表觀遺傳藥物如西達(dá)本胺和地西他濱處理L1236 HL細(xì)胞系，導(dǎo)致HLA基因表達(dá)增加，進(jìn)一步增強(qiáng)了免疫識(shí)別能力，然而研究表明僅依靠HLA基因的上調(diào)可能不足以完全消除腫瘤，仍需其他免疫調(diào)節(jié)作用來(lái)增強(qiáng)抗腫瘤效果?？偟膩?lái)說(shuō)，這些結(jié)果提示了CDP方案在DP治療失敗后的有效性可能與CD30-HRS樣細(xì)胞的耗竭有關(guān)，同時(shí)強(qiáng)調(diào)了表觀遺傳藥物在增強(qiáng)免疫識(shí)別中的潛力，但也指出了需要綜合多種策略來(lái)提高療效。
5.表觀免疫激活多種腫瘤反應(yīng)性CD8+ T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤反應(yīng)
研究者觀察到在經(jīng)過(guò)CDP治療后CD8+ T細(xì)胞顯著增加，而NK細(xì)胞沒(méi)有明顯變化。通過(guò)對(duì)T/ILC細(xì)胞的重新聚類(lèi)分析，識(shí)別出五個(gè)高表達(dá)PDCD1的CD8+T細(xì)胞簇，其中一個(gè)被標(biāo)記為CD8+濾泡輔助T細(xì)胞（CD8+Tfh），其余四個(gè)則表現(xiàn)出耗竭表型但仍具細(xì)胞毒性。CDP治療后，整體CD8+T細(xì)胞的克隆性顯著增加，在對(duì)CDP治療有反應(yīng)的腫瘤中克隆數(shù)發(fā)生擴(kuò)增的較多，減少的克隆中耗竭T細(xì)胞(Tex)占比較高，表明CDP治療減輕了T細(xì)胞的耗竭現(xiàn)象。此外HAVCR2+Tex細(xì)胞顯示出高細(xì)胞毒性和克隆性，可能具有腫瘤反應(yīng)性。CDP治療后，多個(gè)非耗竭細(xì)胞毒性簇與HAVCR2+Tex表現(xiàn)出高TCR共享，進(jìn)一步支持CD8+T細(xì)胞向非耗竭效應(yīng)狀態(tài)轉(zhuǎn)變的假設(shè)。CD8+T細(xì)胞簇與臨床反應(yīng)的關(guān)聯(lián)分析顯示，CDP治療后高細(xì)胞毒性的簇顯著增加，同時(shí)HAVCR2+Tex在治療前已豐富，提示先前治療激活了腫瘤反應(yīng)性T細(xì)胞，但其他因素可能阻礙了有效的抗腫瘤免疫反應(yīng)。
6.免疫抑制IL21+Th細(xì)胞與惡性HRS細(xì)胞相互作用
經(jīng)過(guò)CDP治療后，CD4+T細(xì)胞中的IL21+輔助T細(xì)胞（Th細(xì)胞）在響應(yīng)者中顯著減少，而在非響應(yīng)者的腫瘤中的豐度在治療前和治療期間均較高。且這些細(xì)胞表現(xiàn)出高水平的IL21及CXCR5、PDCD1和ICOS，顯示出類(lèi)似濾泡輔助T細(xì)胞（Tfh）的表型，暗示其可能具有免疫抑制功能。分化軌跡表明IL21+ Th細(xì)胞與前Tfh細(xì)胞形成分支，IL21+Th細(xì)胞的擴(kuò)增克隆在DP組中增加，而CDP組則抑制了這些細(xì)胞的擴(kuò)增，促使其停留在靠前的分化狀態(tài)。同時(shí)，CD30+ HRS樣細(xì)胞與IL21+ Th細(xì)胞之間存在多種相互作用，包括細(xì)胞因子分泌和受體表達(dá)，可能通過(guò)IL6和CD40對(duì)IL21+Th細(xì)胞產(chǎn)生調(diào)節(jié)作用。IL21+Th細(xì)胞通過(guò)分泌IL10等配體也可能調(diào)節(jié)CD30+HRS細(xì)胞的生存，形成正反饋環(huán)路，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和免疫逃逸，這一機(jī)制的發(fā)現(xiàn)為后續(xù)治療策略提供了潛在靶點(diǎn)。
7.表觀免疫重新編程IL21+Th細(xì)胞
研究者為了進(jìn)一步揭示CDP治療的機(jī)制，重點(diǎn)分析了IL21+Th細(xì)胞和CD30- HRS樣細(xì)胞的變化。結(jié)果表明CDP治療后IL21+Th細(xì)胞的組蛋白去乙?；福℉DAC）評(píng)分顯著高于非響應(yīng)患者，表明IL21+Th細(xì)胞可能是CDP治療的直接靶點(diǎn)。治療后，IL21+Th細(xì)胞的基因表達(dá)和信號(hào)通路活性顯著下降，特別是與IL21和IL6相關(guān)的信號(hào)通路，關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子STAT1/3和IKZF3的表達(dá)也顯著降低。此外，CD30-HRS樣細(xì)胞的HDAC評(píng)分較低，表明CDP治療對(duì)CD30-HRS樣細(xì)胞可能有間接影響，CDP治療增強(qiáng)了CD8+ T細(xì)胞/NK細(xì)胞與CD30-HRS細(xì)胞之間的相互作用，激活了細(xì)胞毒性反應(yīng)。總體來(lái)看，CDP治療通過(guò)改變IL21+Th細(xì)胞的表型和功能，抑制了對(duì)CD30+HRS細(xì)胞的免疫支持，并提高了CD30-HRS細(xì)胞的免疫原性和細(xì)胞毒性反應(yīng)，從而改善了cHL患者的免疫環(huán)境和治療效果。
本文中涉及的mIHC實(shí)驗(yàn)（Panel：CD30、DHRS2、PAX5、DAPI）利用艾克發(fā)生物的AlphaXTSA®多靶點(diǎn)免疫組化染色試劑盒（CAT#AXT37100031）直觀檢測(cè)到了DHRS2+CD30-PAX5dim+細(xì)胞的存在。
總結(jié)
本文揭示了CDP療法在cHL患者中的作用機(jī)制。CDP治療可恢復(fù)抗PD-1耐藥的cHL患者的抗腫瘤免疫應(yīng)答，CDP治療通過(guò)改變IL21+Th細(xì)胞的表型和功能，抑制了對(duì)CD30+HRS細(xì)胞的免疫支持，同時(shí)提高了CD30-HRS細(xì)胞的免疫原性和細(xì)胞毒性反應(yīng)，進(jìn)而改善cHL患者的免疫環(huán)境和治療效果。該研究為cHL腫瘤免疫治療提供了理論基礎(chǔ)，同時(shí)為抗PD-1耐藥患者提供了新的治療思路。
參考文獻(xiàn)
[1]Nie J, Wang C, Zheng L, Liu Y, Wang C, Chang Y, Hu Y, Guo B, Pan Y, Yang Q, Hu X, Han W. Epigenetic agents plus anti-PD-1 reshapes tumor microenvironment and restores antitumor efficacy in Hodgkin lymphoma. Blood. 2024 Aug 2:blood.2024024487. doi: 10.1182/blood.2024024487. Epub ahead of print. PMID: 39093981.
